Флуоресцентна микроскопија је револуционирала нашу способност да визуализујемо и проучавамо биолошке узорке, омогућавајући нам да уронимо у замршени свет ћелија и молекула. Кључна компонента флуоресцентне микроскопије је извор светлости који се користи за побуђивање флуоресцентних молекула унутар узорка. Током година, коришћени су различити извори светлости, сваки са својим јединственим карактеристикама и предностима.
1. Меркурова лампа
Живина лампа високог притиска, у распону од 50 до 200 вати, направљена је од кварцног стакла и сферног је облика. У себи садржи одређену количину живе. Када ради, између две електроде долази до пражњења, што доводи до испаравања живе, а унутрашњи притисак у сфери брзо расте. Овај процес обично траје око 5 до 15 минута.
Емисија живине лампе високог притиска је резултат распадања и редукције молекула живе током пражњења електроде, што доводи до емисије светлосних фотона.
Емитује јако ултраљубичасто и плаво-љубичасто светло, што га чини погодним за узбуђивање различитих флуоресцентних материјала, због чега се широко користи у флуоресцентној микроскопији.
2. Ксенонске лампе
Други често коришћени извор беле светлости у флуоресцентној микроскопији је ксенонска лампа. Ксенонске лампе, као и живине, пружају широк спектар таласних дужина од ултраљубичастих до близу инфрацрвених. Међутим, они се разликују по спектру ексцитације.
Живине лампе концентришу своју емисију у скоро ултраљубичастим, плавим и зеленим регионима, што обезбеђује генерисање светлих флуоресцентних сигнала, али долази са јаком фототоксичношћу. Сходно томе, ХБО лампе су обично резервисане за фиксне узорке или слабу флуоресценцију. Насупрот томе, извори ксенонских лампи имају глаткији профил побуде, омогућавајући поређење интензитета на различитим таласним дужинама. Ова карактеристика је корисна за апликације као што је мерење концентрације јона калцијума. Ксенонске лампе такође показују јаку ексцитацију у блиском инфрацрвеном опсегу, посебно око 800-1000 нм.
КСБО лампе имају следеће предности у односу на ХБО лампе:
① Уједначенији спектрални интензитет
② Јачи спектрални интензитет у инфрацрвеном и средњем инфрацрвеном подручју
③ Већа излазна енергија, што олакшава достизање отвора објектива.
3. ЛЕД диоде
Последњих година појавио се нови кандидат у области извора светлости флуоресцентне микроскопије: ЛЕД диоде. ЛЕД диоде нуде предност брзог укључивања и искључивања у милисекундама, смањујући време излагања узорку и продужавајући животни век деликатних узорака. Штавише, ЛЕД светло показује брзо и прецизно распадање, значајно умањујући фототоксичност током дуготрајних експеримената са живим ћелијама.
У поређењу са изворима беле светлости, ЛЕД диоде обично емитују унутар ужег спектра побуде. Међутим, доступно је више ЛЕД трака, што омогућава разноврсне апликације флуоресценције у више боја, чинећи ЛЕД диоде све популарнијим избором у модерним поставкама флуоресцентне микроскопије.
4. Извор светлости ласера
Ласерски извори светлости су веома монохроматски и усмерени, што их чини идеалним за микроскопију високе резолуције, укључујући технике супер-резолуције као што су СТЕД (стимулисано смањење емисије) и ПАЛМ (фотоактивирана локализациона микроскопија). Ласерско светло се обично бира тако да одговара специфичној таласној дужини побуде која је потребна за циљни флуорофор, обезбеђујући високу селективност и прецизност у побуђивању флуоресценције.
Избор извора светлости за флуоресцентни микроскоп зависи од специфичних експерименталних захтева и карактеристика узорка. Слободно нас контактирајте ако вам затреба помоћ
Време поста: 13.09.2023